课程名称

微生物学与免疫学实验

所属学科

医学

教材名称

暂无，参考《微生物与免疫学》实验指导，房红莹、顾冠彬、徐培君、王蕾

授课年级

2019级药学、中药、生物制药班

授课章节

模块一 免疫学实验
（一）非特异性免疫
（二）抗原抗体反应

授课时间

300分钟

1. 教学目标：含知识目标、技能（能力）目标

1. 知识目标：

1. 掌握非特异性和特异性免疫学的反应原理、现象、反应条件、反应方法、目的和应用。

2. 技能（能力）目标：结合实验课程目标

1. 掌握凝集反应的操作方法。

2. 判断凝集反应成功与否的判断标准。

3. 掌握显微镜的使用方法。

4. 识别免疫细胞及吞噬物

5. 掌握沉淀反应的结果判定

6. 掌握琼脂板的制作方法

7. 掌握对流免疫电泳的操作方法

2. 授课内容（依据教学大纲）及时间分配

1. 微生物与免疫学实验室规则及注意事项（10’）

2. 实验内容和实验报告撰写内容简介（10’）

3.凝集反应的原理 （10’）

4. 试管凝集试验的原理和操作（25’）

5.玻片凝集试验的原理和操作（25’）

6.间接凝集：乳胶凝集试验的原理和操作（25’）

7. 观看运用胶体金免疫渗析方法进行孕检的视频和原理降解（15’）

8.中性粒细胞和单核巨噬细胞的吞噬作用原理，显微镜观察吞噬作用，画示意图（30’）

9. 免疫沉淀反应原理讲解（10’）

10. 单向琼脂扩散试验原理及示教片观看（10’）

11. 双向琼脂扩散试验原理及示教片观看（10’）

12. 火箭电泳原理及示教片观看（10’）

13. 琼脂板制作示教及操作（30’）

14. 对流免疫电泳原理及操作（70’）

15. 实验结果观察及记录（10’）

3. 教学重点与难点

1. 教学重点

1. 凝集反应的原理和无菌实验操作技能

2. 显微镜的使用和吞噬细胞的观察

3. 沉淀反应的原理及检测方法

2. 教学难点

1. 无菌操作技能和凝集反应滴液技巧

2. 对流免疫电泳的原理及操作

4. 教学方法选择

1. 理论课堂教学

2. 实验教学：（简要列出实验内容标题）

实验内容：

（1）试管凝集试验

（2）玻片凝集试验

（3）乳胶凝集试验

（4）胶体金免疫渗析方法进行孕检

（5）显微镜观察中性粒细胞和单核巨噬细胞的吞噬作用

（6）单向琼脂扩散试验

（7）双向琼脂扩散试验

（8）火箭电泳

（9）对流免疫电泳

教学方法：

（1）多媒体教学讲授法：通过视频播放、PPT展示和操作路线简图向同学们介绍实验目的、原理、方法、步骤和实验结果解读。

（2）示教法：演示实验操作步骤。

（3）分析讨论法：与同学们一起讨论实验成功或失败的结果及其原因。

5. 更新或补充内容提要

6. 复习思考题

1. 什么是凝集反应？直接凝集反应和间接凝集反应有何区别？

2. 血清学反应需要哪些条件？

7. 学习资源、课外自主学习参考

课程名称

微生物学与免疫学实验

所属学科

医学

教材名称

暂无，参考《微生物与免疫学》实验指导，房红莹、顾冠彬、徐培君、王蕾

授课年级

2019级药学、中药、生物制药班

授课章节

模块二 细菌的基本特性—

（一）细菌的形态与结构检查法

（二）细菌的培养法及代谢产物的检查

（三）细菌的分布、理化因素及生物因素对微生物的影响

（四）细菌毒素的测定

授课时间

600分钟

1. 教学目标：含知识目标、技能（能力）目标

1. 知识目标：

1. 掌握细菌形态与结构的检查方法

2. 掌握细菌的培养法及代谢产物的检查

3. 掌握细菌的分布以及理化因素及生物因素对微生物的影响

4. 掌握细菌内毒素和外毒素的定义、检查原理和检查方法。

2. 技能（能力）目标：结合实验课程目标

1. 掌握显微镜特别是油镜的使用原理和方法

2. 掌握细菌涂片及革兰氏染色方法

3. 掌握普通和特殊培养基的用途

4. 掌握常用的细菌生化反应类型

5. 掌握细菌在咽喉、土壤、空气、手指的分布情况

6. 掌握理化因素和生物因素对细菌生长的影响

7. 掌握细菌内毒素的检查方法-鲎试验

8. 掌握酶联免疫吸附测定法ELISA，测定细菌外毒素

2. 授课内容（依据教学大纲）及时间分配

1. 显微镜特别是油镜的使用原理和操作（20’）

2. 细菌涂片的制作（观看视频和操作）（30’）

3. 革兰氏染色原理讲解和操作（60’）

4. 革兰氏染色结果的观察和记录（20’）

5. 细菌特殊结构示教片观察（20’）

6. 特殊培养基示教（20’）

7. 四种培养基的细菌接种方法示教和操作（60’）

8. 细菌生化反应原理、示教和操作（60’）

9. 细菌生化反应结果观察和记录（10’）

10. 采集咽喉、土壤、空气、手指的细菌，接种于不同培养基培养（40’）

11. 紫外线杀菌试验原理及操作（35’）

12. 药物敏感试验原理及操作（25’）

13. 化学消毒剂敏感试验原理及操作（25’）

14. 消毒仪器介绍（观看视频）（25’）

15. 在实验的等待间隙，对上次课程四种培养基培养结果的观察和记录

16. 细菌内毒素和外毒素的定义及细菌毒素试验简介（10’）

17. 细菌内毒素的测定：鲎试验（40’）

18. 细菌外毒素的测定：ELISA双抗夹心法测定铜绿假单胞菌外毒素（100’）

19. 在细菌外毒素测定试验步骤中的等待时间，完成细菌分布实验，紫外线杀菌试验，细菌抗菌药物敏感性试验和化学消毒剂抑菌作用试验的观察和结果记录。

3. 教学重点与难点

1. 教学重点

1. 显微镜的使用

2. 革兰氏染色的操作步骤、原理和结果观察

3. 培养基的应用

4. ELISA双抗体夹心法的操作步骤、原理和结果分析

2. 教学难点

1. 细菌的代谢特征及检测方法

2. ELISA中抗原、抗体和底物的运用原理的试验操作机巧

4. 教学方法选择

1. 理论课堂教学

2. 实验教学：（简要列出实验内容标题）

实验内容：

1. 细菌涂片制作及革兰氏染色

2. 细菌培养

3. 细菌代谢产物的生化反应检测

4. 咽喉、土壤、空气、手指的细菌检查

5. 紫外线杀菌试验

6. 药物敏感试验

7. 化学消毒剂敏感试验

8. 消毒仪器教学视频

9. 利用鲎试剂检测细菌内毒素

10. 用ELISA酶联免疫法测定铜绿假单胞菌外毒素。制备标曲，分析数据

11. 完成细菌分布实验，紫外线杀菌试验，细菌抗菌药物敏感性试验和化学消毒剂抑菌作用试验的细菌生长情况观察和结果记录

教学方法：

（1）多媒体教学讲授法：通过视频、PPT图文、操作路线简图向同学们介绍实验目的、原理、方法、步骤和实验结果解读。

（2）示教法：演示实验操作步骤。

（3）分析讨论法：与同学们一起讨论实验成功或失败的结果及其原因。

5. 更新或补充内容提要

6. 复习思考题

1. 细菌的培养基必须具备哪些条件？

2. 细菌的生化反应有何意义？

3. 什么是菌落？什么是菌苔？为什么分区划线接种法可以用于细菌的分离培养？

4. 影响抑（杀）菌圈大小的因素有哪些？抑（杀）菌圈大小是否准确地反映出化学消毒剂抑（杀）菌能力的强弱？

5. 什么是内毒素？什么是外毒素？内毒素和外毒素分别有哪些检测方法？（2）

7. 学习资源、课外自主学习参考

课程名称

微生物学与免疫学实验

所属学科

医学

教材名称

暂无，参考《微生物与免疫学》实验指导，房红莹、顾冠彬、徐培君、王蕾

授课年级

2019级药学、中药、生物制药班

授课章节

模块三 药品中沙门菌的检测（一）——（四）

授课时间

300分钟

1. 教学目标：含知识目标、技能（能力）目标

1. 知识目标：

1. 掌握药品中致病菌沙门菌的检查流原理和方法。

2. 技能（能力）目标：结合实验课程目标

（1）掌握药品中致病菌沙门菌的检查流程和具体操作方法。

（2）使用选择培养基的种类和接种方法。

（3）判断沙门菌阳性和阴性的标准。

2. 授课内容（依据教学大纲）及时间分配

1. 药品中沙门菌的检查（一）：接种SS平板（50’）

2. 药品种沙门菌的检查（二）：克氏双糖铁培养基接种（50’）

3. 药品中沙门菌的检查（三）：甘露醇、尿素、半固体、蛋白胨水（50’）

4. 药品中沙门菌的检查（四）：革兰染色、玻片凝集（150’）

3. 教学重点与难点

1. 教学重点

（1）鉴别、选择培养基来分离鉴定沙门菌；生化反应结合革兰染色及血清学鉴定沙门菌。

2. 教学难点

（1）分离、鉴别沙门菌的原理和操作。

4. 教学方法选择

1. 理论课堂教学

2. 实验教学：（简要列出实验内容标题）

实验内容：

（1）利用鉴别、选择培养基（S-S平板）对药品中的细菌进行选择培养以分离沙门菌

（2）接种克氏双糖铁培养基进一步分离培养疑似沙门菌

（3）生化反应鉴定：吲哚试验、尿素酶试验、甘露糖发酵试验，以及细菌动力学试验

（4）革兰染色鉴定

（5）血清学鉴定——玻片凝集试验

教学方法：

（1）多媒体教学讲授法：通过图文、操作路线简图向同学们介绍实验目的、原理、方法、步骤和实验结果解读。

（2）示教法：演示实验操作步骤。

（3）分析讨论法：与同学们一起讨论实验成功或失败的结果及其原因。

5. 更新或补充内容提要

6. 复习思考题

（1）记录在沙门菌的分离培养与鉴定过程中，每一步骤的现象及结果，并加以分析说明（三线表）；

（2）思考题：如何检验药品中的大肠杆菌？请设计实验流程。

7. 学习资源、课外自主学习参考

课程名称

微生物学与免疫学实验

所属学科

医学

教材名称

暂无，参考《微生物与免疫学》实验指导，房红莹、顾冠彬、徐培君、王蕾

授课年级

2019级药学、中药、生物制药班

授课章节

模块四 常见致病性细菌及真菌的基本形态和检测

授课时间

300分钟

1. 教学目标：含知识目标、技能（能力）目标

1. 知识目标：

了解熟悉葡萄球菌、链球菌、破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌和结核分枝杆菌、支原体菌落、螺旋体、放线菌、真菌等各类微生物的基本形态特征和检测方法。

2. 技能（能力）目标：结合实验课程目标

1. 通过实验，识别化脓性球菌各自的形态特征。

2. 掌握金黄色葡萄球菌中血浆凝固酶的检测方法。

3. 熟悉破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌和结核分枝杆菌的形态特征。

4. 熟悉支原体菌落、梅毒螺旋体的形态特征。

5. 掌握口腔奋森螺旋体检查（镀银染色法）。

6. 掌握白假丝酵母菌芽管形成试验原理及操作。

7. 熟悉放线菌、真菌厚膜孢子、大分生孢子、新生隐球菌、白假丝酵母菌、曲霉菌等菌落形态及显微结构。

2. 授课内容（依据教学大纲）及时间分配

（1）淋病奈瑟菌与链球染色标本观察（15’）

（2）葡萄球菌三种色素观察（10’）

（3）甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌的溶血现象（15’）

（4）金黄色葡萄球菌血浆凝固酶试验——试管法（30’）

（5）金黄色葡萄球菌血浆凝固酶试验——玻片法（30’）

（6）破伤风梭菌、产气荚膜梭菌和肉毒梭菌染色标本观察（15’）

（7）结核分枝杆菌抗酸染色方法和染色标本观察（10’）

（8）支原体菌落的形态观察（5’）

（9）梅毒螺旋体的形态观察（10’）

（10）镀银染色方法，以及口腔中奋森螺旋体的镀银染色操作（60’）

（11）放线菌的形态特征讲解及观察（10’）

（12）真菌三种集落形态特征讲解及观察（10’）

（13）真菌厚膜孢子、大分生孢子、新生隐球菌的形态特征讲解及观察（10’）

（14）白假丝酵母菌芽管形成试验讲解及操作（70）

3. 教学重点与难点

1. 教学重点

（1）金黄色葡萄球菌中血浆凝固酶试验的两种方法：玻片法和试管法。

（2）镀银染色法染色螺旋体的原理和操作步骤。

（3）放线菌的形态特征及观察。

（4）真菌三种集落观察注意的关键点。

（5）真菌厚膜孢子、大分生孢子、新生隐球菌的观察的重点。

2. 教学难点

（1）血浆凝固酶试验的两种方法的适用条件和试管法的操作。

（2）镀银染色法染色螺旋体后，镜检鉴定奋森螺旋体。

（3）白假丝酵母菌芽管形成试验操作及结果观察。

4. 教学方法选择

1. 理论课堂教学

2. 实验教学：（简要列出实验内容标题）

实验内容：

（1）观察及镜检葡萄球菌、链球菌、破伤风梭菌 ，产气荚膜梭菌 、肉毒梭菌和结核分枝杆菌、支原体菌落、螺旋体等各类细菌的基本形态特征

（2）金黄色葡萄球菌血浆凝固酶试验——试管法

（3）金黄色葡萄球菌血浆凝固酶试验——玻片法

（4）镀银染色方法检测口腔中奋森螺旋体

（5）白假丝酵母菌芽管形成试验操作及结果观察。

（6）真菌小培养的应用。

教学方法：

（1）多媒体教学讲授法：通过图文、操作路线简图向同学们介绍实验目的、原理、方法、步骤和实验结果解读。

（2）示教法：演示实验操作步骤。

（3）分析讨论法：与同学们一起讨论实验成功或失败的结果及其原因。

5. 更新或补充内容提要

6. 复习思考题

（1）记录淋病奈瑟菌、链球菌的形态（图）；

（2）记录血浆凝固酶试验（试管法、玻片法）的原理、步骤、现象及结果；

（3）思考题：如何检验药品中是否存在金黄色葡萄球菌？

（4）结核分枝杆菌、产气荚膜梭菌、破伤风梭菌、肉毒梭菌、支原体菌落、梅毒螺旋作图；

（5）记录镀银染色的步骤及结果；

（6）记录真菌三种菌落特点

（7）厚膜孢子、大分生孢子、新型隐球菌、放线菌作图

（8）记录白假丝酵母菌芽管形成实验的步骤及      结果（画图）

（9）思考题：结核杆菌为什么用抗酸染色?

（10）真菌小培养技术有何重要意义？

（11）哪些药品中不得检出白假丝酵母菌？为什么？

7. 学习资源、课外自主学习参考

课程名称

微生物学与免疫学实验

所属学科

医学

教材名称

暂无，参考《微生物与免疫学》实验指导，房红莹、顾冠彬、徐培君、王蕾

授课年级

2019级药学、中药、生物制药班

授课章节

模块五 细菌总数的检测

授课时间

100分钟

1. 教学目标：含知识目标、技能（能力）目标

1. 知识目标：

掌握药（食）品中细菌总数的检测方法；掌握平皿法测定供试样品中细菌总数的方法及结果判断。

2. 技能（能力）目标：结合实验课程目标

通过实验，掌握倾注法测定药（食）品中细菌总数的检测方法，掌握菌落计数方法。

2. 授课内容（依据教学大纲）及时间分配

（1）细菌总数的测定的定义（5’）

（2）倾注法测定细菌总数实验操作要点及注意事项（10’）

（3）平皿菌落计数法的原则及举例（10’）

（4）学生分组及动手进行倾注法涂布样液（35’）

（5）学生分组及动手进行菌落数计数及计算（40’）

3. 教学重点与难点

1. 教学重点

（1）倾注法倒菌板。

（2）菌落计数及统计处理。

2. 教学难点

严格规范操作无菌操作及待检测样液的均匀涂布。

4. 教学方法选择

1. 理论课堂教学

2. 实验教学：（简要列出实验内容标题）

实验内容：

（1）细菌总数的测定的定义

（2）倾注法测定细菌总数实验操作要点及注意事项

（3）平皿菌落计数法的原则及举例

（4）学生分组及动手进行倾注法涂布样液

（5）学生分组及动手进行菌落数计数及计算

教学方法：

（1）多媒体教学讲授法：通过图文、操作路线简图向同学们介绍实验目的、原理、方法、步骤和实验结果解读。

（2）示教法：演示实验操作步骤。

（3）分析讨论法：与同学们一起讨论实验成功或失败的结果及其原因。

5. 更新或补充内容提要

6. 复习思考题

（1）记录药（食）品中细菌总数的测定步骤。

（2）记录药（食）品中细菌总数的测定结果。

（3）思考题：细菌平板菌落计数法的影响因素有哪些？应如何避免？

7. 学习资源、课外自主学习参考

课程名称

微生物学与免疫学实验

所属学科

医学

教材名称

暂无，参考《微生物与免疫学》实验指导，房红莹、顾冠彬、徐培君、王蕾

授课年级

2019级药学、中药、生物制药班

授课章节

模块六 病毒学基本检测

授课时间

140分钟

1. 教学目标：含知识目标、技能（能力）目标

1. 知识目标：

了解病毒生物特性，了解常用的病毒的培养方法，熟悉细胞培养接种病毒后病变现象观察及狂犬病毒包涵体的识别，掌握病毒血凝试验的原理、方法及结果。

2. 技能（能力）目标：结合实验课程目标

通过实验，掌握病毒血凝试验的原理、操作方法及结果判定。

2. 授课内容（依据教学大纲）及时间分配

（1）正常细胞、病变细胞（CPE）、狂犬病毒内基小体形态特征（10’）

（2）视频示教病毒的细胞培养及注意事项讲解（15’）

（3）视频示教鸡胚接种病毒及注意事项讲解（15’）

（4）病毒血凝试验操作及结果判定（100’）

3. 教学重点与难点

1. 教学重点

（1）体内外病毒培养方法。

（2）病毒检测方法及原理。

2. 教学难点

病毒血凝试验操作及结果观察。

4. 教学方法选择

1. 理论课堂教学

2. 实验教学：（简要列出实验内容标题）

实验内容：

（1）病毒体内外培养的方法

（2）细胞培养、细胞形变、包涵体的形成

（3）鸡胚接种法培养病毒

（4）学生分组及动手观察病毒及培养病毒的细胞涂片

（5）学生分组及动手进行病毒血凝试验的操作及结果的判定

教学方法：

（1）多媒体教学讲授法：通过图文、操作路线简图向同学们介绍实验目的、原理、方法、步骤和实验结果解读。

（2）示教法：演示实验操作步骤。

（3）视频教学：观看病毒分类及培养、鸡胚接种及病毒血凝试验

（4）分析讨论法：与同学们一起讨论实验成功或失败的结果及其原因。

5. 更新或补充内容提要

6. 复习思考题

（1）记录正常细胞、病毒CPE现象、狂犬病毒的内基小体（图）。

（2）记录病毒血凝试验的步骤和结果。

（3）思考题：病毒培养法有哪几种？目前采用的病毒快速诊断的技术有哪些？

7. 学习资源、课外自主学习参考

课程名称

微生物学与免疫学实验

所属学科

医学

教材名称

暂无，参考《微生物与免疫学》实验指导，房红莹、顾冠彬、徐培君、王蕾

授课年级

2019级药学、中药、生物制药班

授课章节

模块七 实验操作考核

授课时间

60分钟

1. 教学目标：含知识目标、技能（能力）目标

1. 知识目标：

了解熟悉细菌革兰染色的原理和步骤

2. 技能（能力）目标：结合实验课程目标

考察学生对实验技术及相应原理的掌握程度。

2. 授课内容（依据教学大纲）及时间分配

（1）复习回顾细菌革兰染色的原理和操作流程（5’）

（2）取药品中鉴定分离的沙门氏菌进行涂片、革兰染色（30’）

（3）对染色后样品进行显微镜镜检（10’）

（4）对实验结果进行观察和作图（15’）

（5）对操作过程和镜检结果进行评价

3. 教学重点与难点

1. 教学重点

革兰染色原理和操作流程和镜检作图

2. 教学难点

革兰染色的操作规范性

4. 教学方法选择

1. 理论课堂教学

2. 实验教学：（简要列出实验内容标题）

实验内容：

（1）复习回顾细菌革兰染色的原理和操作流程（5’）

（2）取药品中鉴定分离的沙门氏菌进行涂片、革兰染色（30’）

（3）对染色后样品进行显微镜镜检（10’）

（4）对实验结果进行观察和作图（15’）

教学方法：

实验操作考核，对操作过程和镜检结果进行评价。

5. 更新或补充内容提要

6. 复习思考题

7. 学习资源、课外自主学习参考